اندوتوكسين‌ها مواد سمی هستند كه در غشای خارجی باكتریهای گرم منفی يافت میشوند. اين مولكولها در صورت وجود در وسايل پزشكی، داروها يا ساير محصواتی كه با بدن انسان در تماس هستند، میتوانند باعث واكنشهای التهابی شديد و حتی شوك سپتيك شوند. برای اطمينان از ايمنی اين محصوات، آزمايش وجود اندوتوكسين ضروری است.تست اندوتوکسین LAL ( Limulus Amebocyte (Lysate) ) يك روش بسيار حساس و قابل اعتماد برای تشخيص اندوتوكسين ها است.
آزمايش LAL از ماده ليز استخراج شده از سلول های خونی (آمبوسيت) خرچنگ نعل اسبی استفاده می كند. هنگامی كه LAL در معرض اندوتوكسين ها قرار می گيرد، سلسله ای از واكنش ها را آغاز می كند كه منجر به تشكيل ژل می شود كه مقدار ژل تشكيل شده نسبت مستقيمی با غلظت اندوتوكسين ها در نمونه دارد.
تست LAL یک ابزار حیاتی برای اطمینان از ایمنی محصولاتی است که با بدن انسان در تماس هست. تست LAL با شناسایی اندوتوکسین ها به جلوگیری از عفونتهای مرتبط با اندوتوکسین و محافظت از سلامت عمومی کمک میکند.
این تست دارای کاربردهای متفاوتی میباشد از جمله این کاربردها میتوان به موارد زیر اشاره کرد:
ازمایش LAL Limulus Amebocyte Lysate برای تشخیص حضور اندوتوکسین ها که مواد سمی موجود در غشای خارجی باکتری های گرم منفی هست استفاده میشود. اندوتوکسین ها در صورت وجود در دستگاههای پزشکی داروسازی می توانند باعث واکنشهای التهابی شدید و حتی شوک سپتیک شود با سایر محصولاتی که با بدن انسان در تماس هست.
فرآیند ساخت تست LAL پیچیده و زمان بر است. تولید یک دسته LAL ممکن است تا شش ماه طول بکشد.
اولین قدم جمع آوری خون خرچنگ نعل اسبی است. این کار با فرو کردن یک سوزن در قلب خرچنگ نعل اسبی انجام می شود. سپس خون در یک ظرف استریل جمع آوری می شود. هنگامی که خون جمع آوری شد سانتریفیوژ میشود تا آمبوسیتها از پلاسما جدا شوند. امبوسیت ها سپس لیز می شود که آنزیم انعقادی را آزاد می کند.
سپس مواد لیز شده برای حذف هرگونه ناخالصی پاکسازی میشود. این کار با استفاده از تکنیکهای مختلفی مانت فیلتراسیون و کروماتوگرافی انجام می شود. هنگامی که مواد لیز شده خالص شد برای اطمینان از نتایج ثابت و بالا بردن سطح اعتماد به تست استاندارد می شود. این کار با افزودن مقدار مشخصی از اندوتوکسین ها به لیز و اندازه گیری زمان لخته شدن انجام می شود. سپس مواد لیز شده و استاندارد شده در ویالها بسته بندی شده و در دمای ۲۰ درجه سانتیگراد نگهداری می شود.
کیفیت تست LAL برای دقت و قابلیت اطمینان آن بسیار مهم است. تولید کنندگان تستهای LAL باید استانداردهای کنترل کیفیت دقیق را رعایت کنند تا اطمینان حاصل شود که محصولات آنها دارای مشخصات مورد نیاز هستند. این استانداردها عبارت از:
تست اندوتوکسین LAL یک محصول پیچیده و زمان بر است. با این حال ابزاری حیاتی برای اطمینان از ایمنی محصولاتی است که با بدن انسان در تماس هست. با رعایت استانداردهای دقیق کنترل کیفیت تولید کنندگان تستهای LAL میتواند از دقیق و قابل اعتماد بودن محصولات خود اطمینان حاصل کنند.
اگر نیاز به خرید تست اندوتوکسین دارید چند نکته وجود دارد که باید در نظر داشته باشید
حساسیت تست اندوتوکسین بر حسب واحد اندوتوکسین (EU) در میلی لیتر (ml) اندازه گیری میشود. هر چه EU٫ml کمتر باشد. آزمون حساس تر است.
حساسیت مورد نیاز شما به مورد استفاده بستگی دارد. به عنوان مثال دستگاه های پزشکی و دارویی به سطح بسیار بالایی از حساسیت نیاز دارد در حالی که آزمایشهای آب و محیطی ممکن است به سطح حساسیت کمتری نیاز داشته باشت.
تستهای اندوتوکسین در قالبهای مختلفی موجود است، از جمله:
روش gel-clot یکی از ساده ترین انواع روشهای تست LAL و در واقع همان روش سنتی ایجاد لخته است و میتوان حضور یا عدم حضور اندوتوکسین را در نمونه مشخص کند. همانطور که گفته شده در روش سنتی وقتی اندوتوکسین با LAL مواجه میشود بر اثر فعالیت زنجیره انزیمی پروتنازی amoebocyte coagulogen موجود در LAL تبدیل به لخته یا ژل میشود. در کیت های تجاری مبنی بر Gel-Clot تغییر ویژه ای در روش انجام تست داده نشده و تنها با ایجاد رفت سریالی از ماده مورد آزمایش و بررسی ایجاد لخته در زمان مشخص شده در پروتکل کیت حدود میزان اندوتوکسین موجود در نمونه مشخص میشود.
روش gel-clot به نظر حساس ترین و دقیق ترین نوع تست LAL بوده و کمترین میزان مثبت کاذب نسبت به سایر روش ها در این روش مشاهده شده است. همچنین این روش در فارماکوپه آمریکا، اروپا و ژاپن به عنوان روش استاندارد برای تعیین وجود اندوتوکسین در نمونه دارویی معرفی گردیده است. با این وجود این روش زمان بر بوده و قابلیت انجام اتوماتیک ندارد به همین دلیل در حجمهای بالای نمونه و امکان ایجاد خطای انسانی این روش توصیه نمیشود.
در روش کدورت سنجی میزان کدورت ایجاد شده در اثر واکنش LAL با اندوتوکسین اندازه گیری شده و برای تعیین میزان اندوتوکسین استفاده میشود. روش کدورت سنجی روش تغییر یافته از gel-clot است که قابلیت انجام اتوماتیک را دارا است. در این روش ترکیب LAL تغییر یافته ای استفاده میشود که مقدار کمتری از کواگلوژن نسبت به حالت عادی داشته و به همین دلیل به جای ایجاد لخته در ماده ایجاد کدورت میکند. مزیت روش کدورت سنجی این است که یک روش کاملا کمی بوده و به دقت میتواند میزان اندوتوکسین را اندازه گیری نماید.
در سنجش اندوتوکسین به روش کدورت سنجی میزان مشخصی از نمونه و محلول LAL در دمای ۳۷ درجه انکوبه شده و میزان کدورت ایجاد شده نسبت به منحنی استاندارد ارزیابی خواهد شد. این روش نیز مشابه روش رنگ سنجی میتوان به صورت ادامه دار ( سنجش کدورت به صورت پیوسته در کل زمان انکوباسیون ) و یا به صورت سنجش در پایان زمان انکوباسیون انجام شود.
از معایب روش کدورت سنجی این است که انجام این روش برای ترکیباتی که خود کدورت یا رنگ دارد دشوار با امکان ناپذیر است.
این فرمت از یک بستر کروموژنیک برای ایجاد یک واکنش رنگی در صورت وجود اندوتوکسین استفاده می کند. این قالب حساس ترین است اما میتواند گران ترین باشد.
هزینه آزمایش اندوتوکسین بسته به حساسیت فرمت و سازنده متفاوت خواهد بود.
مهم است که قبل از خرید هزینه های تستهای مختلف را با هم مقایسه کنید. با این حال در نظر گرفتن کیفیت تست و شهرت سازنده نیز مهم است.
مهم است که تست اندوتوکسین خود را از یک تامین کننده معتبر خریداری کنید. این به شما کمک میکند تا اطمینان حاصل کنید که محصولی با کیفیت بالا دریافت میکنید که نتایج دقیقی به شما می دهد.
به دنبال تامین کننده ای باشید که شهرت خوبی داشته باشد و پشتیبانی فنی ارائه دهد.
خرید تبت اندوتوکسین میتوان فرآیت پیچیده ای باشد با این حال با رعایت این نکات میتوانید تصمیمی آگاهانه بگیرید و تست مناسب را برای نیازهای خود خریداری کنید.
تست اندوتوکسين LAL ابزاری حیاتی برای اطمینان از ایمنی محصولاتی است که با بدن انسان در تماس هستند. حساسیت بالا، ویژگی و نتایج سریع آن را به ابزاری ارزشمت برای تولید کنندگان آژانسهای نظارتی و محققین تبدیل کرده است. آزمایش LAL ما می توانیم به جلوگیری از عفونتهای مرتبط با اندوتوکسین و محافظت از سلامت عمومی کمک کنیم.
