HPLC قبل از آشنایی با ستون HPLC بهتر است اول با مفهوم HPLC آشنا شویم. آنالیز HPLC که مختصر شده عبارت High Performance Liquid Chromatography است در شیمی تحلیل با نام کروماتوگرافی مایع شناخته میشود و کارایی بالای تکنیکی دارد؛ که برای جداسازی، شناسایی و تعیین کمیت اجزا در مخلوط های مواد غذایی، شیمیایی، دارویی، بیولوژیکی و غیره که در محلول های مایع حل شده اند استفاده می شود. بخش های اصلی دستگاه: HPLC ۱ . پمپ (Pump) ۲ . مخازن حلال (Solvent tanks) ۳ . انژکتور(Injector) ۴ . ستون(Column) ۵ . آشکار ساز (Detector) ۶ . کنترل کننده(Controller) ۷ . گازگیر(Degasser) کاربرد های HPLC · تولید و ساخت HPLC، در علوم آزمایشگاهی و بالینی کاربرد دارد و یک روش کارآمد در صنعت داروسازی است. محصول تهیه شده درصد خلوص بالایی برخوردار است و درنتیجه محصولات خالص تولید می کند. طبق فارماکوپه اروپا، HPLC تنها در ۱۵.۵٪ از سنتزها استفاده میشود، در حالی که در فارماکوپه ایالات متحده این درصد به ۴۴٪ می‌رسد. این تفاوت عمدتاً به دلیل محدودیت‌های مالی و زمانی است، چرا که HPLC در مقیاس بزرگ میتواند بسیار هزینه‌بر باشد. · پژوهش از کاربرد های دیگر HPLC میتوان به مشاهده گونه های مختلف در نمونه های جمع آوری شده گفت . هنگام کشف داده از نمونه در مورد هویت نمونه هم ها، نیاز به استفاده از راه حل های استاندارد است. HPLC روشی برای تأیید نتایج واکنش های سنتز هست؛ زیرا درصد خلوص در این نوع تحقیقات حیاتی است. · پزشکی HPLC می تواند در پزشکی کمک کند زیرا شامل تجزیه و تحلیل دارو می باشد. اما امروزه HPLC در تجزیه و تحلیل مواد مغذی استفاده می شود، که بیشتر در تجزیه تحلیل ادرار و خون برای اکثر آنالیزهای پزشکی با HPLC استفاده می شود. ستون HPLC ستون HPLC یکی از اجزای اصلی دستگاه کروماتوگرافی است که نقش کلیدی در جداسازی ترکیبات شیمیایی دارد. طول این ستون‌ها معمولاً بین ۱۰ تا ۳۰ سانتی‌متر است و از جنس فولاد ضد زنگ یا استیل ساخته میشوند. برای بسته‌بندی ستون HPLC بهتر از یک ماده تک عنصری استفاده میشود که میتواند از پلیمر یا سیلیس با ذرات جامد تشکیل شده باشد. این دستگاه به همراه ستون‌های آن، در جداسازی محلول‌ها و ذرات کوچک‌تر به طور موثری عمل میکند. انواع ستون‌های HPLC ۱ . ستون HPLC فاز نرمال ستون‌های HPLC از ماده سیلیس تولید می شود که فاز ثابت قطبی بیشتر از فاز متحرک بوده است و برای تأمین فاز متحرک هم موادی مثل کلروفرم، هگزان و متیلن کلرید کاربرد دارد. برای جدا کردن ترکیبات محلول، اصل قطبیت اجزای نمونه وارد عمل میشود. در این فرآیند، ترکیبات محلول نمونه که با فاز ثابت قطبی تعامل بیشتری دارند، جدا میشوند. به عبارت دیگر، ترکیبات با قطبیت بالاتر بیشتر با فاز ثابت قطبی تعامل کرده و در نتیجه، از سایر ترکیبات جدا میشوند. کاربرد ستون HPLC فاز نرمال به مایع نرمال فاز قندها ، اولیگو ساکاریدها ، دارو ها ، داروهای قطبی ، گلیکان ها ، ویتامین های محلول در آب ، داروهای شیمی درمانی و غیره اشاره کرد . مزايای استفاده از ستون HPLC فاز نرمال معايب استفاده از ستون HPLC فاز نرمال ۲ . ستون HPLC فاز معکوس ستون فاز معکوس در HPLC برخلاف ستون فاز عادی عمل میکند. در این نوع ستون‌های HPLC ، از هیدروکربن‌های پیوندی و سایر هیدروکربن‌های غیرقطبی به عنوان فاز ثابت استفاده میشود. در فرآیند جداسازی، قطبیت اجزای نمونه نقش اصلی را ایفا میکند. ترکیبات محلول که تعامل بیشتری با فاز متحرک دارند، از ستون جدا میشوند. بنابراین، اجزایی که کمتر با فاز ثابت غیرقطبی تعامل دارند، به راحتی جدا میشوند. این روش برای جداسازی ترکیبات بر اساس قطبیت و تعامل آنها با فازهای ثابت و متحرک موثر است. کاربرد ستون های HPLC مایع فاز معکوس در انواع دارو ها , ویتامین های محلول در چربی (K,E,D,A) ، ویتامین های محلول در آب (B1 ,B2 ,B3 ,B5 ,B6 , B12) ، آنتی بیوتیک ها ، ضد صرع ، اسید آمینه و در بسیاری اسید چرب ، پپتید ، پروتئین ، آنزیم ، DNA ، RNA ، نوکلئوتید ، افزودنی های غذایی ، افزودنی های پلیمر و غیره وجود دارد. مزاياى ستون هاى HPLC فاز معكوس معايب ستون هاى HPLC فاز معكوس ۳ . ستون HPLC تبادل یونی یکی از ستون‌های کروماتوگرافی HPLC ، ستون‌های کروماتوگرافی تبادل یونی هستند که برای جداسازی ترکیباتی که به سادگی یونیزه میشوند، استفاده میشود. فاز متحرک در این ستون‌ها معمولاً یک مایع قطبی مانند محلول آب و نمک است، در حالی که فاز ثابت یک ماده اسیدی یا قلیایی با بار مثبت یا منفی میباشد. برای جداسازی ذرات محلول، نیروی جاذب یونی بین فاز ثابت باردار و ذرات محلول برقرار میشود. این نیروهای یونی به جداسازی موثر ترکیبات کمک می‌کنند و اجازه می‌دهند ترکیبات با بارهای متفاوت از یکدیگر جدا شوند. این تکنیک برای تجزیه و تحلیل مواد یونیزه بسیار مفید است. کاربرد ستون های HPLC مایع تعویض یونی کاربرد های بسیاری دارد که می توان در آمینو اسید ها ، پپتید ، پروتئین ، پورین ، پیریمیدین ، نوکلئوزید ، نوکلئوتید ، اولیگو نوکلئوتید ، DNA و RNA ، محصولات PCR و مونوساکارید ، دی ساکارید و غیره مشاهده کرد. ۴ . ستون های HPLC مایع آب گریز ستون HPLC ابگریز یا کروماتوگرافی آبگریز (HIC) یک روش راحت و ساده است و تفاوت ستون HPLC ابگریز با ستون HPLC فاز معکوس برای اتصال و دفع پروتئین های آبگریز است. این محصول آب گریز بدین صورت کار می کند که استفاده از فازهای متحرک آبی در HIC اختلال در ساختار پروتئین ایجاد کرده و منجر به فعالیت بهتر می شود و مولکول های زیستی با غلظت زیاد نمک به یک سطح آبگریز ضعیف جذب می شوند و با کاهش شیب نمک شسته می شوند . ستون کروماتوگرافی آبگریز یا HIC ، برای بهبود عالی فعالیت پروتئین ، بارش نمک را با دقت کروماتوگرافی ترکیب می کند. از کاربردهای ستون های HPLC مایع تعویض آب گریز می توان RNA ریبوزومی ، پروتئین ، اجزای آنتی بادی ، آنتی بیوتیک ، آنزیم ها و غیره گفت. ۵ . ستون های HPLC مایع تمایلی ستون‌های افینیتی برای جداسازی نمونه‌های پروتئینی بسیار پرکاربرد، گزینش‌پذیر و مؤثر هستند.
سیگما آلدریچ (Sigma-Aldrich) یک شرکت پیشرو در زمینه شیمی، علوم زیستی و بیوتکنولوژی است. این شرکت در سال 1975 با ادغام شرکت شیمیایی سیگما و شرکت شیمیایی آلدریچ تأسیس شد. این شرکت در حال حاضر به عنوان بخشی از تجارت علوم زیستی Merck فعالیت میکند. تامین کننده اصلی بیوشیمیایی Sigma Aldrich سیگما است که شامل آنتی بیوتیک ها، بافرها، کربوهیدرات ها،… و مشتقات آن می باشد. برخی از محصولات Sigma فوكوئيدان فوکوئیدان، ماده‌ای سفید یا قهوه‌ای رنگ به شکل پودر است که از جلبک دریایی پریفرا ماکروسیستیس گرفته شده و شرکت Sigma در تولید آن نقش دارد. این ماده دارای ویژگی‌های زیستی و بیوشیمیایی بسیار مهمی است، از جمله فعالیت‌های ضد تومور، ضد رگ‌زایی، و تقویت سیستم ایمنی… . کاربرد فوکوئیدان از پریفرا فوكوئيدان داراى خواص فيزيكى چشمگیری است كه مى توان آن را بصورت داروهای خوراکی، تزریقی، موضعی، استنشاقى و داروهای های تک (مانند نانو داروها) توسعه و تولید كرد. فوكوئيدان از پريفرا ماكروسيستيس در كرم های ضد التهابى، ضد پیرى پوست و سفيد كننده جزئی جدا نشدنی این محصولات هستند. همچنین میتواند متاستاز توده هاى سرطانى را متوقف كند و سلول هاى T كشنده را عليه توده هاى سرطانى بر مى انگيزد که با این وجود فوكوئيدان از پريفرا ماكروسيستيس را می توان به عنوان داروی ضد سرطان معرفی کرد. ملیتین از زهر زنبور عسل ملیتین یکی از محصولات شرکت Sigma است. این محصول با فرمول شيميایى C98H151N33O31S2 ، داراى ساختارى پيچيده و فضايى مارييچى است که ملیتین از زهر زنبور عسل گرفته می شود. اثرات بيولوژيكى ملیتین از زهر زنبور عسل در بدن انسان میتواند سمیت را از بین ببرد و خاصیت ضد التهاب، ضدميكروب و ضد‌سرطانی هم دارد. کاربرد ملیتین از زهر زنبور عسل مليتين از زهر زنبور عسل به دليل خواصیت‌های ضد التهابى وضد باكتريايى توانسته است در درمان التهاب‌هاى مختلف، عفونت‌ها و برخى از سرطان‌ها کمک کند. مليتين يک مولكول پروتئينى است و می تواند به عنوان يک مولكول سيگنال دهنده سلول هاى بدن ارتباط موثری داشته باشد. این ويژگى‌های مليتين از زهر زنبور عسل باعث میشود تا در زمینه‌های پزشکی و داروسازی کاربرد زیادی اعم از درمان بيمارى‌هاى التهابى، بهبود عملکرد مغز، توليد مواد غذایی و لوازم آرايشى و سموم دارد. پاراپلاست پلاس پارايلاست پلاس نسخه ارتقا يافته پاراپلاست است و برای كارهاى آزمايشگاهى دقيق استفاده میشود. این داروی ارتقا یافته در مطالعه بافت شناسى و خون شناسى بكار مى رود. تفاوت عمده‌ای که پاراپلاست پلاس با پاراپلاست دارد وجود ماده نفوذ دهنده یعنى DMSO است. هنگامی كه به بافت های ضخيم تر و نفوذ پذیری كمتری نیاز است، پاراپلاست پلاس بهترین گزینه است. پاراپلاست پلاس يک محصول شيميايى است حاوی پارافين خالص ، پلى ايزوبوتيلن و دى متيل سولفوكسيد است. از خصوصیاتی پاراپلاست پلاس میتوان به جامد بودن در دمای اتاق، داشتن نقطه ذوب بسیار مناسب، نفوذ پذيرى بسيار بالا به بافت همراه با حفظ ساختار آن و پلاستیكی كردن بافت اشاره کرد. کاربرد پاراپلاست پلاس پاراپلاست پلاس يک محيط بسيار فوق العاده براى قالب گیرى از بافت در حال آزمایش می باشد. در طراحى تركيب پاراپلاست پلاس سعى شده است كه بهترين مواد براى قالب گیرى بافت با درصد خلوص بسيار بالا استفاده شود. برای بررسى نمودن نتايج پروژه و تحقيق در بافت شناسی یک آزمایش دقیق لازم است از پاراپلاست پلاس استفاده شود زیرا یکی از مراحل بسيار حساس در آزمایش های بافت شناسى مرحله برش دقيق توسط دستگاه ميكروتوم است. قبل از برش بافت قالب گيرى الزامی است تا بدون مشکل و آسيب به ساختار، نمونه برش داده شود. کوئرستین کوئرستین در بیشتر مکمل های غذایی یا غذا ها ،ميوه ها، سبزيجات،… و همچنین در هم انواع پلى فنول و فلاونوئيدهاى موجود در قهوه یافت می شود. این محصول شرکت Sigma خواص مانند آنتى اكسيدانى، ضد سرطان، ضد ويروس، ضد التهاب دارا است. از وظایف این محصول این است که با رادیکال‌های آزاد مقابله کند و جریان مواد مغذی در رگ های خونی تقویت كند. از وظایف دیگر کوئرستین می توان مهار ATPase میتوکندری، فسفودی‌استراز، فعالیت PI3-Kinase و PIP Kinase مثال زد. اثرات مهم کوئرستین اثرات ضد سرطانی است به صورتی که اثر ضد پرولیفراتیو بر روی رده‌های سلولی سرطانی ، کاهش رشد سلول‌های سرطانی از طریق گیرنده‌های استروژن نوع 11 و در پایان دستگیری سلول‌های T لوسمی انسان در اواخر مرحله G1 چرخه سلولی نام برد. کاربرد کوئرستین کوئرستین در مبارزه با التهاب و سرطان نقش بسیاری دارد به گونه ای که کوئرستین مى تواند با راديكال هاى آزاد و توده های سرطانی مبارزه كند و آن را ازبین ببرد ؛ کوئرستین به سلامت قلب کمک کند و ديابت و بينایى را بهبود می بخشد. کوئرستین سلامت مغز را افزايش می دهد و علائم پیری را به تأخير می اندازد.همچنین کوئرستین به عنوان يک آنتی اکسیدان مورد استفاده در دارو ها که اثرات سركوب کننده سیستم ایمنی سرم های بالای گلوکز و قند خون را در بیماران دیابتی نوع ٢ معکوس می کند. هموگلبین انسانی هموگلوبین با غلظت طبيعى ٣٣ درصدی جزء اصلى گلبول هاى قرمز و مسئول رنگ قرمز هموگلوبین است و به دليل توانایی هموگلبین در انتقال اكسيژن از ريه ها به بافت های بدن و تسهيل انتقال دی اکسید کربن برگشتى بدن میشود مهم ترین پروتئین تنفسی مهره داران است. این محصول جزء محبوب‌ترین‌های شرکت Sigma است. کاربردهای هموگلوبین انسانی هموگلوبین براى تشخيص سریع پروتئين متصل شونده به رتينول از یک آنزیم immunoassay استفاده مى شود. همچنين از واكنش پلاكتى انسان توسط فاكتور آرامش بخش مشتق از اندوتلیوم جلوگیری می شود. متان سولفونیک اسید متان سولفونيك اسيد (MSA) جزء دسته اى به نام آلكان سولفونيک اسيدها است و متان سولفونيك اسيد به عنوان کاتالیزور و حلال بکار می رود. در دماى محيط ظاهر و حالت فيزيكى متان سولفونيك اسيد متغير است، به طوری که در دماى بالاى ٢٥ درجه سانتيگراد حالتى مایع و بى رنگ دارد و در دمای محيط كمتر از ٢٠ درجه سانتیگراد می رسد به شکل کریستال های سفید رنگ تغییر شکل می دهد. مزيت های متان سولفونیک اسيد می توان نداشتن بو، تركيب نشدن با يون های فلزى در آب، جلوگیرى از تشكيل محصولات اكسيداسيون درطى واكنش، زیست تخریب پذیر بودن و سمیت بسیار پایین را نام برد. فرمول شیمیایی متان
شرکت Merck (مِرک) یک شرکت چند ملیتی آمریکایی است که در سال 1668 میلادی در آلمان تأسیس شد و شرکت Merck تا کنون در زمینه دارویی فعالیت خود را در سراسر جهان ادامه می دهد ، شرکت مِرک با توجه به درامد 59 میلیارد دلاری در سال 2022 یکی از بزرگترین شرکت های داروسازی در جهان شناخته شد. شرکت Merck داروها، واکسن ها و درمان های بیولوژیکی را تولید می کند ،که بیشتر در درمان سرطان و دیابت و ویروس HPV و آبله مرغان و غیره کاربرد دارد. برخی از محصولات Merck: 1. Keytruda KEYTRUDA یکی از محصولات شرکت Merck است این دارو که با کار کردن روی سیستم ایمنی بدن، برخی از سرطان ها را درمان می کند. این دارو با تقویت سیستم ایمنی بدن از اندام ها و بافت های طبیعی در هر ناحیه های مختلف بدن سعی می کند از بدن در برابر حمله توده سرطانی محافظت کند و بر نحوه عملکرد توده سرطانی تأثیر می گذارد. با این وجود گاهی اوقات داروی KEYTURDA بر روی توده سرطانی تآثیر به سزایی ندارد و این مشکلات می تواند در حدی شدید باشد که تهدید کننده زندگی باشد و منجر به مرگ شود. Keytruda در درمان سرطان برخی سرطان های : داروی KEYTRUDA در درمان سرطان هایی که نام برده شد تآثیر دارد ؛ البته لازم به ذکر است مصرف داروی KEYTRUDA حتما باید به تجویز دکتر متخصص باشد، زیرا در غیر این صورت باعث بروز عوارض جانبی جدی می شود. عوارض جانبی KEYTRUDA KEYTRUDA می تواند عوارض جانبی جدی ایجاد کند ؛ در کل عوارض جانبی داروی KEYTURDA را می توان به دو بخش تقسیم کرد زمانی که داروی KEYTRUDA به تنهایی مصرف شود که باعث احساس خستگی، درد در عضلات، اسهال، تب، سرفه، کاهش اشتها، خارش، تنگی نفس، یبوست، استخوان ها یا مفاصل و درد ناحیه معده (شکم)، حالت تهوع، و سطوح پایین هورمون تیروئید شود. بخش بعدی زمانی است که داروی KEYTRUDA همراه با شیمی درمانی های خاص یا شیمی درمانی با داروهای پرتودرمانی تجویز می شود که باعث ضعف ، احساس خستگی ، تهوع، یبوست، اسهال، کاهش اشتها، بثورات پوستی، استفراغ، سرفه، مشکلات تنفسی، تب، ریزش مو، التهاب اعصاب که ممکن است باعث درد، ضعف و فلج در بازوها و پاها شود، تورم پوشش داخلی دهان، بینی، چشم ها، گلو، روده یا واژن، زخم های دهان، سردرد، کاهش وزن، درد ناحیه معده (شکم)، درد مفاصل و ماهیچه ها، سطوح پایین هورمون تیروئید، مشکل خواب، خونریزی، تاول یا بثورات پوستی در کف دست دست و کف پا و عفونت ادراری می شود. 2. Januvia JANUVIA یک داروی نسخه ای که برای بزرگسالان مبتلا به دیابت نوع 2 تجویز میشود این دارو یکی از معروف‌ترین داروهای شرکت Merck است. داروی JANUVIA برای کاهش قند خون در بزرگسالان همراه با رژیم غذایی و ورزش تجویز می شود. عوارض جانبی داروی JANUVIA · عفونت دستگاه تنفسی فوقانی · گرفتگی یا آبریزش بینی · گلو درد · سردرد · مشکلات کلیوی، گاهی اوقات نیاز به دیالیز · قند خون پایین (هیپوگلیسمی): بهتر است داروی JANUVIA با تجویز پزشک تنهایی مصرف شود زیرا اگر JANUVIA را با داروی دیگری مانند سولفونیل اوره یا انسولین مصرف شود، امکان بروز قند خون پایین وجود دارد،که علائم قند خون پایین شامل : · درد مفاصل: مهارکننده‌های DPP-4 مانند JANUVIA داروهایی هستند که برای کنترل قند خون در بیماران مبتلا به دیابت نوع 2 استفاده میشوند. یکی از عوارض جانبی احتمالی این داروها، درد مفاصل است که در برخی از بیماران ممکن است به صورت شدید ظاهر شود. اگر دچار درد مفاصل شدید شده‌اید، این موضوع را با پزشک خود مطرح کنید. توجه داشته باشید که مصرف داروی JANUVIA به صورت خودسرانه کم یا زیاد نکنید زیرا منجر به افزایش خطرات سلامتی می شود. · واکنش پوستی: داروی JANUVIA میتوانند در برخی از افراد واکنشهای جانبی جدی پوستی ایجاد کند، یکی از این واکنش‌ها، بیماری پوستی نادری به نام پمفیگوئید بولوز است. پمفیگوئید بولوز یک بیماری خودایمنی است که باعث ایجاد تاول‌های بزرگ و دردناک روی پوست میشود و میتواند نیاز به درمان در بیمارستان داشته باشد. 3. Gardasil GARDASIL یک واکسن است که برای کمک به محافظت در برابر انواع خاصی از ویروس پاپیلومای انسانی (HPV) طراحی شده است. این ویروس میتواند منجر به بیماری‌های مختلفی مانند سرطان دهانه رحم، سرطان مقعد، و زگیل ناحیه تناسلی شود. واکسن GARDASIL برای استفاده در مردان و زنان در سنین 9 تا 26 سال توصیه میشود. عوارض جانبی GARDASIL شایع‌ترین عوارض جانبی واکسن Gardasil شامل موارد زیر است: این عوارض جانبی در محل تزریق معمولاً خفیف و موقتی هستند و خودبه‌خود بهبود می‌یابند. با این حال، اگر عوارض جانبی شدیدتر یا پایدارتر بودند، حتماً با پزشک خود تماس بگیرید. اگر داروی gardasil همزمان با Menactra [Meningococcal (گروه‌های A، C، Y و W-135) واکسن Polysaccharide Diphtheria Toxoid Conjugate] و Adacel [Tetanus Toxoid ، کاهش‌یافته] مصرف شود، باعث بروز واکنش های آلرژیک مشکل در تنفس، خس خس سینه ، غدد متورم در نواحی گردن، زیر بغل، یا کشاله ران، درد مفاصل، خستگی، ضعف یا سردرگمی غیرمعمول ، لرز، درد پا ، ماهیچه های دردناک ، ضعف عضلانی و تشنج و غیره می شود ، در صورت مشاهده هر گونه علائم ، فوراً با پزشک خود تماس بگیرید. 4. Varivax واکسن VARIVAX به عنوان یک واکسن ویروس زنده برای پیشگیری از آبله مرغان (واریسلا) شناخته میشود و به صورت تزریقی استفاده میشود. این واکسن حاوی ویروس ضعیف شده آبله مرغان است و با تحریک سیستم ایمنی بدن، به محافظت در برابر این بیماری کمک میکند. واکسیناسیون گسترده باعث کاهش شیوع آبله مرغان در جامعه میشود و به حفاظت از افرادی که نمی‌توانند واکسن بزنند، کمک میکند. عوارض جانبی VARIVAX عوارض جانبی داروی VARIVAX پس از مصرف شامل تب، درد، تورم، خارش یا قرمزی در محل تزریق، جوش های آبله مرغان روی بدن یا محل تزریق، سوزن سوزن شدن پوست، زونا (هرپس زوستر) و غیره می باشد. گاهی اوقات مصرف داروی VARIVAX باعث بروز واکنش آلرژیک می باشد این واکنش ها شامل تنگی نفس یا خس خس سینه، کهیر است. اگر هر یک از واکنش آلرژیک را در مدت کوتاهی پس از مصرف VARIVAX داشتید، به پزشک خود اطلاع دهید 5. Isentress
اندوتوكسين‌ها مواد سمی هستند كه در غشای خارجی باكتریهای گرم منفی يافت میشوند. اين مولكولها در صورت وجود در وسايل پزشكی، داروها يا ساير محصواتی كه با بدن انسان در تماس هستند، میتوانند باعث واكنشهای التهابی شديد و حتی شوك سپتيك شوند. برای اطمينان از ايمنی اين محصوات، آزمايش وجود اندوتوكسين ضروری است.تست اندوتوکسین LAL ( Limulus Amebocyte (Lysate) ) يك روش بسيار حساس و قابل اعتماد برای تشخيص اندوتوكسين ها است. تست LAL چگونه كار می كند آزمايش LAL از ماده ليز استخراج شده از سلول های خونی (آمبوسيت) خرچنگ نعل اسبی استفاده می كند. هنگامی كه LAL در معرض اندوتوكسين ها قرار می گيرد، سلسله ای از واكنش ها را آغاز می كند كه منجر به تشكيل ژل می شود كه مقدار ژل تشكيل شده نسبت مستقيمی با غلظت اندوتوكسين ها در نمونه دارد. مزايای تست اندوتوكسين LAL کاربردهای تست LAL تست LAL یک ابزار حیاتی برای اطمینان از ایمنی محصولاتی است که با بدن انسان در تماس هست. تست LAL با شناسایی اندوتوکسین ها به جلوگیری از عفونتهای مرتبط با اندوتوکسین و محافظت از سلامت عمومی کمک میکند. این تست دارای کاربردهای متفاوتی میباشد از جمله این کاربردها میتوان به موارد زیر اشاره کرد: ازمایش LAL Limulus Amebocyte Lysate برای تشخیص حضور اندوتوکسین ها که مواد سمی موجود در غشای خارجی باکتری های گرم منفی هست استفاده میشود. اندوتوکسین ها در صورت وجود در دستگاههای پزشکی داروسازی می توانند باعث واکنشهای التهابی شدید و حتی شوک سپتیک شود با سایر محصولاتی که با بدن انسان در تماس هست. چگونگی ساخت بهترین تست اندوتوکسین فرآیند ساخت تست LAL پیچیده و زمان بر است. تولید یک دسته LAL ممکن است تا شش ماه طول بکشد. اولین قدم جمع آوری خون خرچنگ نعل اسبی است. این کار با فرو کردن یک سوزن در قلب خرچنگ نعل اسبی انجام می شود. سپس خون در یک ظرف استریل جمع آوری می شود. هنگامی که خون جمع آوری شد سانتریفیوژ میشود تا آمبوسیتها از پلاسما جدا شوند. امبوسیت ها سپس لیز می شود که آنزیم انعقادی را آزاد می کند. سپس مواد لیز شده برای حذف هرگونه ناخالصی پاکسازی میشود. این کار با استفاده از تکنیکهای مختلفی مانت فیلتراسیون و کروماتوگرافی انجام می شود. هنگامی که مواد لیز شده خالص شد برای اطمینان از نتایج ثابت و بالا بردن سطح اعتماد به تست استاندارد می شود. این کار با افزودن مقدار مشخصی از اندوتوکسین ها به لیز و اندازه گیری زمان لخته شدن انجام می شود. سپس مواد لیز شده و استاندارد شده در ویالها بسته بندی شده و در دمای ۲۰ درجه سانتیگراد نگهداری می شود. کنترل کیفیت کیفیت تست LAL برای دقت و قابلیت اطمینان آن بسیار مهم است. تولید کنندگان تستهای LAL باید استانداردهای کنترل کیفیت دقیق را رعایت کنند تا اطمینان حاصل شود که محصولات آنها دارای مشخصات مورد نیاز هستند. این استانداردها عبارت از: تست اندوتوکسین LAL یک محصول پیچیده و زمان بر است. با این حال ابزاری حیاتی برای اطمینان از ایمنی محصولاتی است که با بدن انسان در تماس هست. با رعایت استانداردهای دقیق کنترل کیفیت تولید کنندگان تستهای LAL میتواند از دقیق و قابل اعتماد بودن محصولات خود اطمینان حاصل کنند. خرید تست اندوتوکسین اگر نیاز به خرید تست اندوتوکسین دارید چند نکته وجود دارد که باید در نظر داشته باشید حساسیت مورد نیاز خود را تعیین کنید حساسیت تست اندوتوکسین بر حسب واحد اندوتوکسین (EU) در میلی لیتر (ml) اندازه گیری میشود. هر چه EU٫ml کمتر باشد. آزمون حساس تر است. حساسیت مورد نیاز شما به مورد استفاده بستگی دارد. به عنوان مثال دستگاه های پزشکی و دارویی به سطح بسیار بالایی از حساسیت نیاز دارد در حالی که آزمایشهای آب و محیطی ممکن است به سطح حساسیت کمتری نیاز داشته باشت. یک فرمت تست را انتخاب کنید تستهای اندوتوکسین در قالبهای مختلفی موجود است، از جمله: سنجش اندوتوکسین به روش ژل کلات (Gel-clot method) روش gel-clot یکی از ساده ترین انواع روشهای تست LAL و در واقع همان روش سنتی ایجاد لخته است و میتوان حضور یا عدم حضور اندوتوکسین را در نمونه مشخص کند. همانطور که گفته شده در روش سنتی وقتی اندوتوکسین با LAL مواجه میشود بر اثر فعالیت زنجیره انزیمی پروتنازی amoebocyte coagulogen موجود در LAL تبدیل به لخته یا ژل میشود. در کیت های تجاری مبنی بر Gel-Clot تغییر ویژه ای در روش انجام تست داده نشده و تنها با ایجاد رفت سریالی از ماده مورد آزمایش و بررسی ایجاد لخته در زمان مشخص شده در پروتکل کیت حدود میزان اندوتوکسین موجود در نمونه مشخص میشود. روش gel-clot به نظر حساس ترین و دقیق ترین نوع تست LAL بوده و کمترین میزان مثبت کاذب نسبت به سایر روش ها در این روش مشاهده شده است. همچنین این روش در فارماکوپه آمریکا، اروپا و ژاپن به عنوان روش استاندارد برای تعیین وجود اندوتوکسین در نمونه دارویی معرفی گردیده است. با این وجود این روش زمان بر بوده و قابلیت انجام اتوماتیک ندارد به همین دلیل در حجمهای بالای نمونه و امکان ایجاد خطای انسانی این روش توصیه نمیشود. سنجش اندوتوکسین به روش کدورت سنجی (Turbidimetric method) در روش کدورت سنجی میزان کدورت ایجاد شده در اثر واکنش LAL با اندوتوکسین اندازه گیری شده و برای تعیین میزان اندوتوکسین استفاده میشود. روش کدورت سنجی روش تغییر یافته از gel-clot است که قابلیت انجام اتوماتیک را دارا است. در این روش ترکیب LAL تغییر یافته ای استفاده میشود که مقدار کمتری از کواگلوژن نسبت به حالت عادی داشته و به همین دلیل به جای ایجاد لخته در ماده ایجاد کدورت میکند. مزیت روش کدورت سنجی این است که یک روش کاملا کمی بوده و به دقت میتواند میزان اندوتوکسین را اندازه گیری نماید. در سنجش اندوتوکسین به روش کدورت سنجی میزان مشخصی از نمونه و محلول LAL در دمای ۳۷ درجه انکوبه شده و میزان کدورت ایجاد شده نسبت به منحنی استاندارد ارزیابی خواهد شد. این روش نیز مشابه روش رنگ سنجی میتوان به صورت ادامه دار ( سنجش کدورت به صورت پیوسته در کل زمان انکوباسیون ) و یا به صورت سنجش در پایان زمان انکوباسیون انجام شود. از معایب روش کدورت سنجی این است که انجام این روش برای
